概念：

原代細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率,，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆,，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞。克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀,。

基本步驟：

1、取對(duì)數(shù)生長期的各組細(xì)胞,，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞,，并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。

2,、將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,，每組細(xì)胞分別以每皿50、100,、200個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻,。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3周,。

3,、經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí),，終止培養(yǎng),。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次,。加4%多聚甲醛固定細(xì)胞5mL固定15分鐘,。然后去固定液，加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10～30分鐘,，然后用流水緩慢洗去染色液,，空氣干燥。

4,、將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,，用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆，或在顯微鏡（低倍鏡）計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù),。zui后計(jì)算克隆形成率,。

克隆形成率 =（克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）×100%

平板克隆形成試驗(yàn)方法簡單，適用于貼壁生長的原代細(xì)胞,。適宜底物為玻璃的,、塑料瓶皿。試驗(yàn)成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度,。細(xì)胞一定要分散得好,，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過大,。

552-46-5 1-萘胺鹽酸鹽;1-氨基萘鹽酸鹽; α-萘胺鹽酸鹽 英文名稱： CAS號(hào)： 1-NaphthylaMine hydrochloride;1-AMinonaphthalene hydrochloride;

90-15-3 1-萘酚;α-萘酚;α-羥基萘;1-羥基萘 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphthol;1-Naphthalenol;α-Hydroxynaphthalene;1-Hydroxynaphthalene

330581-20-9 1-萘酚-3,6-二磺酸鈉 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphthol-3,6-disulfonic acid disodiuM salt hydrate

596-01-0 1-萘酚酞;α-萘酚酞 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphtholphthalein;α-Naphtholphthalein;p-α-Naphtholphthalein;3,3-Bis(4-hydroxy-1-naphthyl)-phthalide

13922-41-3 1-萘基硼酸 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphthylboronic acid

66-77-3 1-萘甲醛;α-萘甲醛 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphthaldehyde;

86-55-5 1-萘甲酸;α-萘甲酸;1-萘羧酸 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphthoic acid;Naphthalene-1-carboxylic acid

879-18-5 1-萘甲酰氯 英文名稱： CAS號(hào)： 1-Naphthoyl chloride
原代細(xì)胞