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培養(yǎng)原代細(xì)胞的凍存步驟

時(shí)間:2018-4-27閱讀:1772
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原代細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù),。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無限的,。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融,。 
1. 凍存細(xì)胞 
(1)選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液,。 
(2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,,計(jì)數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 /ml左右密度,,離心,,去上清。 
(3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,,小牛血清2ml,,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),,按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,,可使冰點(diǎn)降低,,使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
(4)分裝于無菌凍存管中,,每管加1.5m懸液,。 
(5)旋好凍存管并仔細(xì)檢查,一定要蓋緊,,做好標(biāo)記,。 
(6)凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,,在30~40min時(shí)間內(nèi),,下降到液氮表面,再停30min后,,直接投入液氮中,。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,,過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促進(jìn)冰晶形成,。 
操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套,,以免液氮凍傷。 原代細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù),。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,,儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融,。 

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