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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>公司動態(tài)>>原代細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)方法原理 原代細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多.常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus),,聚乙二醇(Polyethyleneglycol,,PEG)和電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇,,因?yàn)樗椎?、簡便,且融合效果穩(wěn)定,。PEG的促融機(jī)制尚不*清楚,,它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。
實(shí)驗(yàn)材料
雞紅細(xì)胞
試劑,、試劑盒
PEGHanks液
儀器,、耗材
顯微鏡離心機(jī)水浴箱離心管試管載玻璃片蓋玻片
實(shí)驗(yàn)步驟 1. 取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。
2. 稱取0.5克PEG(MW=4 000)放入試管內(nèi),在酒精燈上融化之,,迅速加入0.5 ml 預(yù)熱的Hanks液混勻制成50%的PEG溶液,。放入37℃水浴中待用。
3. 取上述10%的雞紅細(xì)胞懸液1 ml 放入離心管中,,再加入5 ml Hanks液混勻,,然后以1 000 rpm 離心5分鐘,小心棄去上清,,用指彈法將細(xì)胞團(tuán)塊彈散,。
4. 取上述50%PEG溶液0.5 ml,在1分鐘內(nèi)滴加到雞紅細(xì)胞懸液,,邊加邊輕輕搖動混勻,。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過程都要求在37℃水浴內(nèi)進(jìn)行,。
5. 緩慢滴加9 ml Hanks液以終止PEG的作用,,在37℃水浴內(nèi)靜置5分鐘。
6. 離心棄上清后,,取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片,,加蓋片鏡檢。
7. 結(jié)果觀察:在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起,,形成一個異核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞,。
8. 融合率的計算:在高倍鏡下隨機(jī)計數(shù)200個細(xì)胞(包括融合的與未融合的細(xì)胞),,以融合原代細(xì)胞(含兩個或兩個以上的細(xì)胞核的細(xì)胞)的細(xì)胞核數(shù)除以總細(xì)胞核數(shù)(包括融合與未融合的細(xì)胞核)即得出融合率。
Terconazole 200mg 曲康唑標(biāo)準(zhǔn)品 67915-31-5
Terfenadine 200mg 特非那定標(biāo)準(zhǔn)品 50679-08-8
Terfenadine Related Compound A 100mg 特非那定相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 76815-60-6
Terfenadine Related Compound B 50mg 特非那定相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品
Terpin Hydrate 750mg 萜品標(biāo)準(zhǔn)品 2451/1/6
tert-Butylmethyl ether 1.2ml×3ampules 甲基叔丁基醚標(biāo)準(zhǔn)品 1634-04-4
Testolactone CIII 125mg 睪內(nèi)酯酮標(biāo)準(zhǔn)品 968-93-4
Testosterone CIII 125mg 睪酮標(biāo)準(zhǔn)品 58-22-0
Testosterone Cypionate CIII 200mg 環(huán)戊丙酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)品 58-20-8
Testosterone Enanthate CIII 200mg 庚酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)品 315-37-7
Testosterone Propionate CIII 200mg 丙酸睪丸素標(biāo)準(zhǔn)品 57-85-2
原代細(xì)胞
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