1. 原代細(xì)胞不要燒瓶口,。

大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑,？知道為什么嗎？燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi),。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼,。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈,。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。

對(duì)于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看,。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長沒有任何好處，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,，密度特別低的細(xì)胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍,，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃,，把因子都給晃散了,。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細(xì)胞,，細(xì)胞老是長不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長,。

3. 不要怕消化,。

在傳代的時(shí)候,，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度，早早地終止消化,。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過夜,，細(xì)胞也沒事,。我一般是等原代細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來,。還有,，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大,，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。
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原代細(xì)胞