牛抗凝血酶3(AT-III)elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中?？鼓?(AT-III)水平。用純化的抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入抗凝血酶3(AT-III)，再與HRP標記的抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的抗凝血酶3(AT-III)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值）,，通過標準曲線計算樣品中?？鼓?(AT-III)濃度。
?？鼓?(AT-III)elisa試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(80U/L）0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP）活性,。
牛抗凝血酶3(AT-III)elisa試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
40U/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
20U/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
10U/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
5.0U/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.5U/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,，然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl,，再加入顯色劑B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl,，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值）,。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
牛抗凝血酶3(AT-III)elisa試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照牛抗凝血酶3(AT-III)elisa試劑盒說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
?？鼓?(AT-III)elisa試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月