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178次植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定植物組織,,細胞及其它相關樣本中植物三磷酸腺苷(ATP)含量,。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物三磷酸腺苷(ATP)水平,。用純化的植物三磷酸腺苷(ATP)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入三磷酸腺苷(ATP),,再與HRP標記的三磷酸腺苷(ATP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的三磷酸腺苷(ATP)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物三磷酸腺苷(ATP)濃度,。
試劑盒組成:
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1個 1個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品:225 ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒操作步驟:
?標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*,、第二孔中分別加標準品100μl,,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,,混勻,;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻,;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,,再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為150 ng/L,100 ng/L,50 ng/L,25 ng/L,12.5 ng/L)。
?加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同),、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
?溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
?配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。
?洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,,拍干,。
?加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。
?溫育:操作同3,。
?洗滌:操作同5。
?顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
?終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
?測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
注意事項:
?試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存,。
?濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果,。
?各步加樣均應使用加樣器,,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,,推薦使用排槍加樣,。
?請每次測定的同時做標準曲線,做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5),。
?封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。
?底物請避光保存,。
?嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
?所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
?本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準,。
計算:
以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,
在坐標紙上繪出標準曲線,,根據樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋
倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值
代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數,,即為樣品的實際濃度,。
(此圖僅供參考)
植物三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上,。
2.批內與批見應分別小于9%和11%
檢測范圍:
10 ng/L -300 ng/L
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃,。
2.有效期:6個月
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