大鼠前列腺素Ｅ２酶聯(lián)免疫分析elisa試劑盒實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素-2（IL-2）水平。用純化的人白細胞介素-2（IL-2）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-2（IL-2）,，再與HRP標記的羊抗人受體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-2（IL-2）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素-2（IL-2）含量,。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

50ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品（12μg/L）

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

大鼠前列腺素Ｅ２酶聯(lián)免疫分析elisa試劑盒標本處理及要求 

1．血清,、血漿、腦脊液,、腹腔液標本可直接測定,；

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

3．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,，在*,、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后在*孔和第二孔中先各取50μl棄掉,；再各取50μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為8μg/L,，4μg/L ,，2μg/L,，1μg/L，0.5μg/L）,。
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
溫育：操作同3,。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

檢測范圍：

0.4μg/L -10μg/L

規(guī)格：

96人份/盒

大鼠前列腺素Ｅ２酶聯(lián)免疫分析elisa試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月