A9,；小鼠皮下結(jié)締組織細胞技術(shù)參數(shù)：
細胞名稱：A9   小鼠皮下結(jié)締組織細胞
組織來源：皮下結(jié)締組織,；疏松結(jié)締組織和脂肪；正常
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形      態(tài)：貼壁,；成纖維細胞樣
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備培養(yǎng)基,；北美胎牛血清，10%,；雙抗1%,。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二． A9細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
1. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若A9細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
2. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
3. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
A9；小鼠皮下結(jié)締組織細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。
下面T25瓶為例；
      1．細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
      2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至zui終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
注意事項：
1.        收到A9細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們,。
2.        先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右）,，穩(wěn)定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜,。
3.        靜置后鏡檢,，拍照，記錄細胞狀態(tài),。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況,。
4.      貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,，瓶蓋可稍微擰松,。
5.        細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清,。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基,，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,，以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。
6.        細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,，
7.        因為細胞培養(yǎng)過程外因太多,，所以我們的售后保障期為一周,，超過一周的細胞我們會酌情處理，但不提供免費更換服務(wù),。
A9,；小鼠皮下結(jié)締組織細胞運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇,；（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。