H9c2(2-1),；大鼠心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
細(xì)胞名稱：H9c2(2-1)     大鼠心肌細(xì)胞
組織來源：心臟,，心肌層
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形      態(tài)：貼壁；成肌細(xì)胞樣
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備培養(yǎng)基,；北美胎牛血清,，10%；雙抗1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二． H9c2(2-1)細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
1. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若H9c2(2-1)細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
2. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
3. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
H9c2(2-1),；大鼠心肌細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例,；
      1．細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
      2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
注意事項(xiàng)：
1.        收到H9c2(2-1)細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們,。
2.        先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右）,，穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。
3.        靜置后鏡檢,，拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長情況,。
4.      貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，收集細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松,。
5.        細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,，一半用客戶自備的培養(yǎng)基,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳,。
6.        細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制,，
7.        因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周,，超過一周的細(xì)胞我們會酌情處理,，但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。
H9c2(2-1),；大鼠心肌細(xì)胞運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。