大鼠肝星形細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)：
該細(xì)胞于原代末期凍存。

細(xì)胞特性
1）來(lái)源：大鼠肝臟
2）形態(tài)：貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細(xì)胞接受后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日,，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?/p>

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。
                       
本公司的大鼠肝星形細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO,，貨號(hào)11995-065),，90%；胎牛血清,，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，zui后的重懸液使用血清,。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心,，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們,。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),，100*，200*各一張）,，觀察記錄大鼠肝星形細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況,。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境,、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,，期間間隔時(shí)間不能大于7天,。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注意防護(hù),，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。