人乳腺癌細(xì)胞使用說(shuō)明書：
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1)干冰運(yùn)輸,，收到后 立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2)存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì) 胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。
細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1. 準(zhǔn)備L-15培養(yǎng)基(L-15:GIBC0,貨號(hào)41300039),，90%;胎牛血清,，10%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%;二氧化碳,，5%。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%,。
3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。

2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度,。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化,。
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中,。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加l-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的 新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì) 胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄 去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞 收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走),，加 入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入1〇%DMSO后進(jìn)行凍 存,。

人乳腺癌細(xì)胞注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立 即與我們,。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注 意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
細(xì)胞介紹
MDA-MB-435S是一種紡錘形的細(xì)胞,，1976年由其親本(MDA-MB-435)中篩選得到。 MDA-MB-435是從一名31歲的轉(zhuǎn)移性乳腺導(dǎo)管腺癌女性患者胸水中分離得到的,。 但近來(lái)證明MDA-MB-435細(xì)胞被M14黑色素瘤細(xì)胞污染,。

細(xì)胞特性
1)來(lái)源：乳腺導(dǎo)管腺癌
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
內(nèi)切核酸酶III處理DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    規(guī)格：    20次
FGP處理DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    規(guī)格：    20次
紫外線處理DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    規(guī)格：    20次
細(xì)胞DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    規(guī)格：    20次
人乳腺癌細(xì)胞