1、原代細胞機械刮除法：

是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）,、或裹少許脫脂棉制成,，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序為：

（1）標記：鏡下觀察,，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位,；

（2）刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中,，肉眼或顯微鏡窺視下,，刮除無標記空間；

（3）用Hanks液沖洗一兩次,，洗除被刮掉的細胞,；

（4）注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細胞殘留,，可重復刮除至*除掉為止

2,、反復貼壁法：

根據(jù)腫瘤細胞比成纖維細胞貼壁速度慢的特點，并結(jié)合使用不加血清的營養(yǎng)液,，把含有兩類細胞的細胞懸液反復貼壁,，使兩類細胞相互分離，操作方法與傳代相同,。

（1）待細胞生長達一定數(shù)量后,，倒出舊培養(yǎng)液，用胰酶消化后,，Hanks 沖洗2次,，加入不含血清的培養(yǎng)液，吹打制成細胞懸液,；

（2）取編號為此A,、B,、C三個培養(yǎng)瓶；首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中,。置溫箱中靜止培養(yǎng)5～20分鐘后,，輕輕傾斜培養(yǎng)瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液,，再接種入B培養(yǎng)瓶中后,；向A瓶中補充少許*培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)；

（3）培養(yǎng)B瓶中細胞5～20分鐘后,，接處理A的方法,，把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中；再向B瓶中補加*培養(yǎng)基,。

當三個瓶內(nèi)都含有培養(yǎng)液后,，均在溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如操作成功,，次日觀察可見A瓶主要為成纖維細胞,，B瓶兩類細胞相雜，C瓶可能主要為癌細胞,。必要時可反復處理多次,，直至癌細胞純化為止。

3,、消化排除法：

此法曾用于乳癌細胞的培養(yǎng),，具體程序是：

（1）原代細胞先是用0.5%胰蛋白酶和0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培養(yǎng)細胞一次，然后再換成新的混合液繼續(xù)消化,，并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養(yǎng)瓶,，到半數(shù)細胞脫落下來后，便立即停止消化,；

（2）把消化液吸入離心管中,，離心去上清，吸入另瓶中,，加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng),；向原瓶內(nèi)也補加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),。用此法處理后，成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落,。經(jīng)過幾次反復處理,，可能把成纖維細胞除凈,。

4、膠原酶消化法：

本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點,，通過消化進行選擇,。

（1）可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發(fā)現(xiàn)成纖維細胞被除掉后,，即終止消化,；

（2）用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),，可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈,，可再次重復,。

5、其它方法：

有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細胞生長的作用,；也有人用聚蔗糖制備成比重1.025～1.085的密度梯度離心液,，加入細胞懸液后，在23℃中 800g離心  10分種,。在比重1.025～1.050層為成纖維細胞,，在比重1.050～1.085層為上皮細胞，再經(jīng)過分離進行培養(yǎng),。zui近也有人應用原代細胞特殊化學物如 SOD抑制成纖維細胞生長的方法,。