1,、原代細(xì)胞機(jī)械刮除法：

是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）、或裹少許脫脂棉制成,，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）,。刮除程序?yàn)椋?/p>

（1）標(biāo)記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長腫瘤細(xì)胞的部位,；

（2）刮除：棄掉培養(yǎng)液,，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下,，刮除無標(biāo)記空間,；

（3）用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞,；

（4）注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至*除掉為止

2,、反復(fù)貼壁法：

根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁速度慢的特點(diǎn),，并結(jié)合使用不加血清的營養(yǎng)液，把含有兩類細(xì)胞的細(xì)胞懸液反復(fù)貼壁,，使兩類細(xì)胞相互分離,，操作方法與傳代相同,。

（1）待細(xì)胞生長達(dá)一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液,，用胰酶消化后,，Hanks 沖洗2次，加入不含血清的培養(yǎng)液,，吹打制成細(xì)胞懸液,；

（2）取編號為此A、B,、C三個(gè)培養(yǎng)瓶,；首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中。置溫箱中靜止培養(yǎng)5～20分鐘后,，輕輕傾斜培養(yǎng)瓶,，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液，再接種入B培養(yǎng)瓶中后,；向A瓶中補(bǔ)充少許*培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng),；

（3）培養(yǎng)B瓶中細(xì)胞5～20分鐘后，接處理A的方法,，把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中,；再向B瓶中補(bǔ)加*培養(yǎng)基。

當(dāng)三個(gè)瓶內(nèi)都含有培養(yǎng)液后,，均在溫箱中繼續(xù)培養(yǎng),。如操作成功，次日觀察可見A瓶主要為成纖維細(xì)胞,，B瓶兩類細(xì)胞相雜,，C瓶可能主要為癌細(xì)胞。必要時(shí)可反復(fù)處理多次,，直至癌細(xì)胞純化為止,。

3、消化排除法：

此法曾用于乳癌細(xì)胞的培養(yǎng),，具體程序是：

（1）原代細(xì)胞先是用0.5%胰蛋白酶和0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培養(yǎng)細(xì)胞一次,，然后再換成新的混合液繼續(xù)消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,，到半數(shù)細(xì)胞脫落下來后,，便立即停止消化；

（2）把消化液吸入離心管中,，離心去上清,，吸入另瓶中，加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng),；向原瓶內(nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),。用此法處理后,，成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落。經(jīng)過幾次反復(fù)處理,，可能把成纖維細(xì)胞除凈,。

4、膠原酶消化法：

本法是利用成纖維細(xì)胞對膠原酶較為敏感的特點(diǎn),，通過消化進(jìn)行選擇,。

（1）可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,，當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后,，即終止消化；

（2）用Hanks洗滌處理一次后,，更換新培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng)，可獲純凈腫瘤細(xì)胞,。如成纖維細(xì)胞未被除凈，可再次重復(fù),。

5,、其它方法：

有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細(xì)胞生長的作用；也有人用聚蔗糖制備成比重1.025～1.085的密度梯度離心液,，加入細(xì)胞懸液后,，在23℃中 800g離心  10分種。在比重1.025～1.050層為成纖維細(xì)胞,，在比重1.050～1.085層為上皮細(xì)胞,，再經(jīng)過分離進(jìn)行培養(yǎng)。zui近也有人應(yīng)用原代細(xì)胞特殊化學(xué)物如 SOD抑制成纖維細(xì)胞生長的方法,。