人和動脈不同部位,、不同血管如大動脈與小動脈,、毛細(xì)血管，以及靜脈血管之間存在差異,，在處理這些細(xì)胞時應(yīng)分別對待,。血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)較小，近似圓形,，呈均勻排列,，一般取材于人和動物的臍帶。
1．人大動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
人大動脈內(nèi)皮細(xì)胞可來自手術(shù),、病理活檢組織,，也可來自尸體（需在死后24h內(nèi)取材），在取材過程中應(yīng)注意無菌操作,。
（1）方法：小心剝除已游離的大血管外膜,，置于盛有冷的磷酸鹽平衡鹽溶液平皿中反復(fù)漂洗，洗凈血管內(nèi),、外面的血液和脂質(zhì),，然后剪開血管,，放入37℃消化液中,，60min,，消化結(jié)合后,，用23號針頭注射器吸取消化液沖洗血管內(nèi)腔,，zui后收集消化液置無菌試管中,，離心（1000rpm 7min）棄上清,，加入含血清培養(yǎng)基中,，使細(xì)胞重新懸并調(diào)整細(xì)胞數(shù),，接種于相應(yīng)大小培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，37℃恒溫溫箱培養(yǎng)，一周后內(nèi)皮細(xì)胞可長成單層,，呈多角形鋪成石狀排列,。
（2）注意事項(xiàng)：①如果小于23號針頭則回收內(nèi)皮細(xì)胞效果差，若針頭過大則注射器內(nèi)壓大會吸入緊貼內(nèi)皮細(xì)胞的平滑肌細(xì)胞，因此注意使用恰當(dāng)?shù)尼橆^,；②人血管內(nèi)皮細(xì)胞對營養(yǎng)條件要求高,，是依賴于生長因子的一種細(xì)胞。常用的培養(yǎng)基為RPMI 1640,，培養(yǎng)時添加15% FBS,，15%Nu-Serum，5～20μg/ml的內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（ECGF）以及100μg/ml的肝素,。改進(jìn)的培養(yǎng)基有MCDB109培養(yǎng)基,，市場上也有內(nèi)皮細(xì)胞商品培養(yǎng)基，可根據(jù)需要選擇購買,；③培養(yǎng)基中必須加入相應(yīng)抗生素,，zui終濃度：慶大霉素為15μg/ml，氨芐青霉素為50μg/ml,，二性霉素B1～2μg/ml,，二甲胺四環(huán)素1μg/ml。在48h內(nèi)可以防止細(xì)胞感染,，3日后還應(yīng)添加慶大毒素,。此方法也適用于人大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)，但靜脈壁薄,，操作困難,，細(xì)胞容易老化。
2．高度動脈硬化的血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)動脈硬化血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng),，對培養(yǎng)基的要求同正常內(nèi)皮細(xì)胞,，技術(shù)關(guān)鍵是分離細(xì)胞。動脈硬化內(nèi)皮細(xì)胞層混有脂肪斑化,，粥樣腫脹的巨噬細(xì)胞,。除去這種巨噬細(xì)胞zui有效的方法是利用內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞比重的差異，通過離心的方法達(dá)到分離的目的,。通常用淋巴細(xì)胞分離液,，首先經(jīng)消化液處理，將所得內(nèi)皮細(xì)胞的沉渣放入不含血清的8mlRPMI 1640液再漂浮后,，預(yù)先在另一試管加入5ml淋巴細(xì)胞分層液（比重1.0717）,，再將細(xì)胞輕輕加入。加完后,，800xg,，23℃離心30min，內(nèi)皮細(xì)胞沉著于管底,，巨噬細(xì)胞漂浮于上層,。
3．臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
在嬰兒出生時立即將臍帶放置于無菌的500ml磷酸鹽溶液（PBS）中低溫保存。次日分離細(xì)胞。臍帶有一根靜脈兩根動脈,，通常用內(nèi)腔大靜脈,。將洗凈的靜脈一端用夾子夾緊,，一端注入消化液,，靜置孵育片刻。然后PBS或培養(yǎng)液反復(fù)抽吸內(nèi)腔,，收集后與消化液一并離心,、沉淀內(nèi)皮細(xì)胞。所用培養(yǎng)基與大動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基相同,，臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,、大動脈內(nèi)皮細(xì)胞易于培養(yǎng)，既使不加生長因子在zui初幾代細(xì)胞也會增殖良好,。