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細(xì)胞毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟

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1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度,。
2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),,把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中,。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,,0.25,,0.50,1.0,,2.0,,4.0,8.0mg/ml,。
3)每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),,如脫落,出現(xiàn)空泡,,匯合度下降和變圓,。
4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代,。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代,。
6)重復(fù)步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,,確定污染是否以已被消除,。

 

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