(一) 準(zhǔn)備和安裝濾器

在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開(kāi)包有清洗滅菌好的過(guò)濾器的牛皮紙,，并架好,。膠管一段接入濾泵再插入待除菌的液體中,，出口端膠管伸入到已消毒的瓶子中,。用濾泵做正壓過(guò)濾，壓力數(shù)字為2,。過(guò)濾后檢查濾膜是否完好無(wú)損,。

(二) 合成培養(yǎng)基的配制

1,、 取3000ml三蒸水,，加入合成培養(yǎng)基干粉,，用磁力攪拌一定時(shí)間(2-4h)使之充分溶解。

2,、 通入適量CO2 或加入6mol/L鹽酸調(diào)pH至6.0左右,。

3,、 加入一定量的NaHCO3調(diào)節(jié)pH至7.0左右。

4,、 加水至zui終體積,。

5、 在超凈工作臺(tái)中對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌,，分裝入250ml或500ml培養(yǎng)瓶中,，用翻冒塞塞緊瓶口。

6,、 4℃冰箱儲(chǔ)存(可以-20℃儲(chǔ)存),。

(三) 小牛血清的處理

市場(chǎng)上出售的小牛血清一般做了滅菌處理，但在使用前還要做熱滅活處理,，即通過(guò)加熱的方法破壞補(bǔ)體,。

1、 將血清加熱到56℃并保存30min,，期間要不時(shí)的輕輕搖晃,，使受熱均勻，防止沉淀析出;

2,、 處理后的血清儲(chǔ)存于4℃;

3,、 小牛血清在使用前進(jìn)行篩選以掌握血清的質(zhì)量。

(四) 生長(zhǎng)培養(yǎng)基的配制

除無(wú)血清培養(yǎng)之外,，各種合成培養(yǎng)基在使用前需要加入一定量的小牛血清和抗生素,。

1、培養(yǎng)基分裝成小瓶(100ml-200ml)以便使用,，翻冒塞塞緊瓶蓋;

2,、按以下比例配制：

基本培養(yǎng)基占80%-90%，小牛血清占10%-20%,。

按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),，使用青霉素和鏈霉素的終濃度分別是100U/ml和100μg/ml。

五,、 注意事項(xiàng)

1,、 培養(yǎng)細(xì)胞使用的瓶子和飯盒應(yīng)與提取RNA和培養(yǎng)細(xì)菌的瓶子和飯盒嚴(yán)格分開(kāi)。因?yàn)橛糜谔幚硖崛NA的DEPC水(0.1%焦炭酸二乙酯)是一種致癌物,，可能影響細(xì)胞生長(zhǎng);而培養(yǎng)過(guò)細(xì)菌的用品也不應(yīng)與細(xì)胞混用,。

2、 過(guò)濾時(shí)壓力不可過(guò)大,，否則細(xì)菌易濾過(guò)達(dá)不到除菌效果,，或使濾膜破裂。分裝時(shí)需根據(jù)使用量的多少選擇合適大小的瓶子,，并且每瓶只能裝2/3體積的液體,，過(guò)多時(shí)瓶子易爆或膠塞自噴,。

3、 濾器用畢立即刷洗,，過(guò)蒸餾水,，晾干收藏。