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2137次1) 配制培養(yǎng)基使用新制備的三蒸水,。一般在試驗(yàn)前當(dāng)天或前一天制備為好,。調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配制,。
2) 制備培養(yǎng)基的器皿清洗要干凈,，烤干后備用(濾器、濾膜,、量筒,、移液管及盛放培養(yǎng)基的小瓶等存放和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基液體的器具都應(yīng)進(jìn)行滅菌)。
3) 溶解培養(yǎng)基：將干粉培養(yǎng)基溶于總量1/3的水中,，再用水洗包裝袋內(nèi)面兩次,，倒入培養(yǎng)液中。振蕩或超聲助溶,，一般不要加熱助溶,。
4) 補(bǔ)加試劑：根據(jù)包裝袋說(shuō)明和試驗(yàn)需要加入NaHCO3(2.0g)、谷氨酰胺,、丙酮酸鈉,、HEPES等其他試劑。
5) 加抗生素：一般抗生素終濃度為――青霉素100U/ml,，鏈霉素100U/ml,。市售青霉素為80萬(wàn)U/瓶，可溶于4ml體積,，每一升培養(yǎng)液中加0.5ml即可,。市售鏈霉素為100萬(wàn)U/瓶，可溶于5ml體積,，每一升培養(yǎng)液中也加0.5ml即可,。無(wú)鏈霉素的情況下，用慶大霉素代替,，終濃度調(diào)為50～200U/ml,。
6) 調(diào)pH值：加水到900ml(在需要加10%小牛血清的情況下)，然后用5% NaHCO3調(diào)節(jié)pH到7.2,。
7) 過(guò)濾除菌：宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張,，上層為0.45um，下層為0.22um,，以保證過(guò)濾效果,。注意濾膜正面(光面)朝上。過(guò)濾后分裝于小瓶中(100或200ml),。
8) 加小牛血清：根據(jù)培養(yǎng)基配制的量將小牛血清分裝,，冷凍保存(-20℃),。臨用前將加入小牛血清(10%~20%)。
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