體外培養(yǎng)細(xì)胞無菌操作注意事項(xiàng)

【細(xì)胞培養(yǎng)前準(zhǔn)備】

在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序,。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好,。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品,、清點(diǎn)無誤后將其放置操作場所(培養(yǎng)室,、超凈臺)內(nèi)，然后開始消毒,。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后．囚物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會,。

【操作野消毒】

無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次(拖布要)．紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺臺面每次實(shí)驗(yàn)前要用75％酒精擦洗,。然后紫外線淌毒30min,。在工作臺面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線，消毒時(shí)工作臺面上用品不要過多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果,。—些操作用具如移液器,、廢液缸、污物盒,、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時(shí)紫外線消毒,。

【洗手和著裝】

原則上和外科手術(shù)相同。平時(shí)僅做觀察不做培養(yǎng)操作時(shí),，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服,。在利用超凈臺工作時(shí)，因整個(gè)前臂要伸入箱內(nèi),，應(yīng)著長袖的清潔工作服,，并于開始操作前要用75％酒精消毒手。如果實(shí)驗(yàn)過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手,。進(jìn)入原代培養(yǎng)室需*洗手還要戴口罩,、著消毒衣帽。

【火焰消毒】 

在無菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈,。以后一切操作，如按裝吸管帽,、打開或封閉瓶口等,，都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過長,，以防退火,，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷,。吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼,，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時(shí)會把有害物帶入營養(yǎng)液中,。開啟,、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短,。防止因溫度過高燒死細(xì)胞,。另外膠塞過火焰時(shí)也不能時(shí)間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,，危害培養(yǎng)細(xì)胞,。

【操作】

進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動作要準(zhǔn)確敏捷,，但又不必太快,，以防空氣流動，增加污染機(jī)會,。不能用手觸及已消毒器皿,，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換,。為拿取方便,，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè),，左手用品在左側(cè),，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性,，組織或細(xì)胞在未做處理之前,，勿過早暴露在空氣中。同樣,，培養(yǎng)液在未用前,，不要過早開瓶；用過之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會,。吸取營養(yǎng)液,、PBS、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí),，均應(yīng)分別使用吸管,，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е?a href="http://sorrent.com.cn/st342345/">細(xì)胞交叉污染,。工作中不能面向操作野講話或咳嗽,，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺面及雙手,。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方,，瓶口zui易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口,，則應(yīng)將吸管丟掉,。