蘇木精-伊紅染色使用說明

【試劑配制】

蘇木精染液蘇木精配方很多，現(xiàn)介紹常用的是Harris蘇木精染液,。

蘇木精 1g

95％乙醇溶液 10ml

鉀礬或銨礬 20g

蒸餾水 200ml

氧化汞 0.5g

冰醋酸 8.0ml

先將蘇木精溶于乙醇溶液,。鉀礬加溫溶解燒瓶后,，將倒入，繼續(xù)加熱1min,。加熱停止后,，緩慢加入氧化汞0．5g，再繼續(xù)加熱煮沸1min,。迅速將燒瓶移人冰水內(nèi)。染液冷卻呈深色時,，加冰醋酸過濾后即可使用,。棕色磨口瓶保存。室溫保存2個月,，4℃保存4個月左右。

1.0％伊紅染液將1.0g水溶性伊紅溶100ml蒸餾水中,，每100ml伊紅液中加0.2ml冰醋酸,。

【實驗步驟】

(1)石蠟片經(jīng)脫蠟、水化,，單層細胞片經(jīng)漂洗固定。

(2)蘇木素染液染5～10min(染色時間與溫度,、染液成熟度有關),。

(3)自來水換數(shù)次，標本轉為深藍色,。

(4)分色：浸入1％稀鹽酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d鹽酸)分色數(shù)秒鐘至1min，脫去多余的藍浮色,，標本轉為淡紫紅色鏡下呈紫紅色,，胞質無色或灰藍色(后者為幼稚細胞)。

(5)藍化：自來水浸洗10min或數(shù)小時，甚至更長,，標本從淡紫紅色轉為鮮艷的淺藍色。注意：為縮短自來水浸洗時間,，使蘇木素更加顯色,，可將標本置淡氨水溶液(400ml自來水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鮮艷的淺藍色,，經(jīng)此處理的標本,，要經(jīng)自來水充分浸洗,，否則會影響伊紅染色。

(6)蒸餾水漂洗,。

(7)伊紅染液5～10min,，進行對比染色。

(8)用蒸餾水洗去玻片的浮色,經(jīng)70％,、80％、90％梯度乙醇溶液脫水各一次,，再分別經(jīng)95％,、100％乙醇溶液脫水各兩次，每次1min,。

(9)浸入二甲苯兩次，每次1min,。中性樹膠封片

【注意事項】

(1)Harris蘇木精染液即配即用，不能久存,，宜少量配用,。

(2)HE染色時,，除大批標本采取浸染外，一般以滴染為好,。染液反復使用而被水稀釋,使特異性染色和染色速度下降,。

(3)蘇木精染液出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，是染液變質的一種指示,，但濾液仍可使用一段時間。蘇木精染液效力判斷方法為：將蘇木精染液滴人自來水中，若染液出現(xiàn)由紫紅色變?yōu)樗{色的現(xiàn)象,，即證實染液有效,。

(4)蘇木精染色后，鹽酸乙醇溶液分色是關鍵步驟：以細胞核染色清晰,、細胞質基本無色為佳。核過染,，延長分色時間,；染色太淺，則應重新染色,。

(5)伊紅染色后,，低濃度乙醇溶液脫水后極易脫色：為防止此現(xiàn)象的發(fā)生,，標本脫水至95％乙醇溶液后，再轉入95％乙醇溶液配制的1％伊紅液中復染3～5min分鐘,，然后繼續(xù)脫水透明,可獲得滿意效果,。

(6)*脫水后，轉入二甲苯中出現(xiàn)混濁現(xiàn)象,，為脫水不*的表現(xiàn)。此時應退回乙醇溶液或更換100％乙醇重新脫水,。

(7)封片時,，蓋玻片要大于切片。切片裸露,，標本很快褪色。

(8)市售95％乙醇溶液常含雜質,，只能用于脫水或清潔玻片,。

(9)二甲苯是一種易揮發(fā)的有毒液體，實驗者要帶眼罩,、口罩,、手套,，在通風的地方操作。