小鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

小鼠心肌細(xì)胞比乳鼠心肌難養(yǎng),，用無(wú)血清培養(yǎng)基，呈桿狀,，橫紋清楚,，在培養(yǎng)基里細(xì)胞不搏動(dòng)。
小鼠心肌細(xì)胞分離一般是采用二型膠原酶分離,，濃度為1mg/ml（用無(wú)鈣臺(tái)氏液配制）,，同時(shí)酶液里加入牛磺酸,，BSA,。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠開胸后,，迅速取出心臟,，放入冰的臺(tái)氏液中,，找到主動(dòng)脈后，掛上Langendorff裝置,，衡流泵灌入無(wú)鈣臺(tái)氏液（37度）,，開始心臟會(huì)搏動(dòng)幾下，這樣把心臟中的淤血擠出（此處也有人用有鈣臺(tái)氏液灌流,，好讓心臟充分搏動(dòng),，把淤血擠出，不過我們摸索發(fā)現(xiàn)只要取心臟到掛上去的時(shí)間短,，一般搏動(dòng)幾下就能把淤血清楚干凈了）,。幾分鐘后，換酶液開始灌流心臟,，一般開始時(shí),，心臟較軟，待消化一段時(shí)間后變硬,，繼續(xù)消化后又變軟,，且心臟發(fā)白，這時(shí)候就可以停止消化,，將心室剪下,，放入KB液中，用剪刀剪碎后,，用滴管吹打,，取上清，繼續(xù)加入KB液,，吹打,，直到上清液不渾濁為止，一般吹打3－4次即可,。將各次上清合并,，吹打過濾后，沉降20分鐘左右,，棄上清,，加入無(wú)血清培養(yǎng)基（MEM，不含L－谷氨酰胺,，并加入肌酸,，?；撬幔珺SA,，肉毒堿，HEPES）,，吹打,，1000轉(zhuǎn)/分離心半分鐘，棄上清,，再洗1－2次后,，將沉淀加入到6％的BSA中沉降15－20分鐘（純化心肌細(xì)胞），然后計(jì)數(shù),，點(diǎn)板或培養(yǎng),。
　　此法中如果各步注意無(wú)菌操作，zui后先用加倍雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后,，再換正常培養(yǎng)基,，可適用于條件不是很好的試驗(yàn)室。如果能在板或瓶?jī)?nèi)加入Laminin處理后,，貼壁很好,。如果分離出來的心肌細(xì)胞，逐級(jí)復(fù)鈣后培養(yǎng),，狀態(tài)更好,。*狀態(tài)此中方法能培養(yǎng)7天以上。