GH3 (大鼠垂體瘤細胞)凍存培養(yǎng)基

時間：2024/6/26閱讀：234

GH3 (大鼠垂體瘤細胞)凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基,。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑,。還可使用門配制的凍存培養(yǎng)基,。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果,。

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白,、無菌凍存培養(yǎng)基,，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存,。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程,。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書,。

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存,，直至使用,。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系,。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來,。用該細胞所需培養(yǎng)基重新懸浮細胞,。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比,。根據(jù)所需活細胞密度,，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘,。在無菌條件下小心倒掉上清液,，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類,。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中,。分裝時,，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài),。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,，使溫度每分鐘大約降低 1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜,。

會員登錄