神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞,；SK-N-MC操作步驟

時間：2024/5/30閱讀：174

神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞；SK-N-MC操作步驟:

1,、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液,，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以去除殘余的血清,。

②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可,，室溫放置 0.5～2min,，不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察,，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,，吸除細(xì)胞消化液,。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞,，即可直接用于后續(xù)實驗,。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化,。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來,。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞,，盡量去除細(xì)胞消化液后,，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實驗,。

2,、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

冷凍保存細(xì)胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存,。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,，再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,，以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。

神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞,；SK-N-MC操作步驟

會員登錄

收藏該商鋪

提示