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SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞,;WI38/VA13細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程

時(shí)間:2024/3/20閱讀:164
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SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞,;WI38/VA13細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA-GP培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,,貨號(hào)21875-091),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。


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