粘質(zhì)沙雷菌探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法

時間：2024/2/26閱讀：188

測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系,。

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。|

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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