小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl,，注入與吸出間隔60秒,。洗板5次,。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，在潔凈的吸水紙上拍干,，每孔加洗滌液350μl,，浸泡1-2分鐘,，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干,。洗板5次,。

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫,；試劑或樣品配制時,，均需充分混勻，并盡量避免起泡,。

1.加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡,，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時,。為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干,，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時,。

3.棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板 3次,，每次浸泡1-2分鐘,，大約350μl /每孔，甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干,。

干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,，加上覆膜，37℃溫育1小時,。

5.棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板5次,，方法同步驟3,。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,，但不可超過30分鐘,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止),。

7.每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,，預(yù)熱儀器,，設(shè)置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束,。