CMR協(xié)同刺激分子受體ELISA Kit注意事項：

1.加樣：

①實驗樣本過多時,，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差,；

②加酶試劑后,，用吸水紙吸干孔外試劑；

③作定量試驗時,，使用加樣器加注試劑,，并經(jīng)常校正其準確性，此外,，要做到一份樣本一個移液頭,，防止交叉污染。

2.溫育：

①如有兩種溫度,，盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應時間的條件；

②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察,；

③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應",，因此盡量采用水浴,；

3.洗板：

①手工洗板時,，拍板時要垂直，避免交叉污染,，用力不能過猛,，防止抗原抗體復合物脫離；

②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出,；

③為了洗滌效果好,，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,，或適當增加洗板的次數(shù),；

4.顯色：

ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,，則提供的底物為A和B兩瓶應用液,；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑,。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光,。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械,。

5.判定：

讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm,；定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果,，酶標儀不應置于陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試,。

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