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小鼠CD19分子(CD19)Elisa試劑盒操作步驟

時(shí)間:2022/2/17閱讀:279
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小鼠CD19分子(CD19)Elisa試劑盒操作步驟:


1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。


240pg/ml


5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品


150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


120pg/ml


4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品


150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


60pg/ml


3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品


150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


30pg/ml


2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品


150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


15pg/ml


1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品


150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液


    2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于         酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。


3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   


4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用


5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。


6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。


7. 溫育:操作同3,。


8. 洗滌:操作同5。


9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.


10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。


11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

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