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天冬酰胺合成酶(AS)操作流程:
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL,;空白孔不加。
4. 除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。
6. 每孔加入底物A,、B各50μL,,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),,在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
試劑使用須知:
(1)請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī),、文獻(xiàn),、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,,再進(jìn)行安全操作,。
(2)通常購(gòu)買試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,,更加注意其他保管和管理,。
(3)萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作,。對(duì)于使用后的廢棄物,,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理,。
(4)購(gòu)買后,,請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng);做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制,;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),,做好必要的安全對(duì)策;對(duì)沒有標(biāo)明其危害特性,、有害特性的,,也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護(hù)用具,,小心翼翼進(jìn)行操作,。
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