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土壤蔗糖酶(S-SC)操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加,。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。
6. 每孔加入底物A,、B各50μL,37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值,。
樣本收集與前處理:
血清(漿)可直接測定,。
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測定方法進(jìn)行提取后測定。
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,,離心取上清測定,。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌,、植物組織:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定,。
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