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腸道病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,，再推算出其濃度,。
2.如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性,，則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40,。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30,。對(duì)待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,，如果小于或等于 35 則為陽性,。如果在 35-40 之間,，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性,，如果小于 35,，則為陽性。
樣品 RNA 的制備
如果有N個(gè)樣品,，*設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）,?？梢杂?0μL陽性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC,。另外用水作為NC,。用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容,。也以選購本公司的柱式病毒RNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝,，該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板,，省略了RNA提取步驟。
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