羅湖病毒（TiLV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/h1>

時(shí)間：2020/3/26閱讀：394

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羅湖病毒（TiLV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/strong>使用方法:

一,、樣品 RNA 的制備

1,、用自選方法抽提病毒樣品 RNA,。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout

2,、或柱式病毒 RNAout,。

二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴,。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），

反應(yīng)終體積為 20μL,。

4. 42℃保溫 60 分鐘,。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),，然后放置在冰上待用,。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化,。

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取,、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值）,，通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

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