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1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
48ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
24ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
12ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
6ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
3ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,，然后再加待測樣品10µl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl,，空白孔除外。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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