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兔子端粒酶(TE)ELISA試劑盒操作步驟及保存方法

時(shí)間:2019/9/11閱讀:564
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兔子端粒酶(TE)ELISA試劑盒操作步驟

1,、編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),,每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔,、陽性對(duì)照2 孔,、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)。

2,、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

3、配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用,。

4,、加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照 50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。

5,、洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。

6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。

7、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,,再加入顯色劑B 50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘,。

8,、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

9,、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2,、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4、組織勻漿-----將組織加入適量生li鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液

5、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

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