兔子端粒酶（TE）ELISA試劑盒操作步驟及保存方法

時間：2019/9/11閱讀：537

1,、編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔,、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同),。

2,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

3、配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用,。

4,、加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

5,、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6,、加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7,、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15 分鐘,。

8、終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(此時藍色立轉黃色),。

9、測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

保存方法
1,、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4,、組織勻漿-----將組織加入適量生li鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液

5,、保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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