葡聚糖凝膠G-25的操作步驟

時間：2019/7/17閱讀：2569

葡聚糖凝膠G-25說明：
葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25),，吸水率是2.5mL/g干膠，葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,，含有大量的羥基,，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹；G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同,；葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠G-25操作步驟：
1,、毫升蒸餾水,，攪拌均勻，在室溫溶脹6小時,，或沸水浴溶脹2小時,，一般采用后一種方法,；再用傾瀉法除去凝膠上層水及細小顆粒,，用蒸餾水反復(fù)洗滌幾次，再以緩沖溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗滌2—3次,，使pH和離子強度達到平衡,，zui后抽去溶液及凝膠顆粒內(nèi)部氣泡，凝膠可保存在緩沖液內(nèi),。

2.裝柱：將層析柱洗凈,，垂直固定在鐵支架上，選擇有薄膜端作為層析柱下口,，將下口凝膠表面平齊時,，關(guān)閉下端出口。

3,、用少量洗脫液清洗層析柱加樣區(qū),，共洗滌三次，每次清洗液應(yīng)*進入凝膠柱內(nèi)后,，再進行下一次洗滌,；zui后在凝膠表面上加入洗脫液，保持高度為3—4cm,。

4,、洗脫與收集：連接好凝膠柱層析系統(tǒng)，調(diào)節(jié)洗脫液流速為每分鐘1毫升，進行洗脫,；仔細觀察樣品在層析柱內(nèi)的分離現(xiàn)象,，收集洗脫液，每收集3毫升即換一支收集管(試管預(yù)先編號),，收集約20管左右,，樣品即可*被洗脫下來；將各收集管中的洗脫液分別用721型分光光度計在波長540nm處測定其光密度,。

5,、凝膠回收處理方法：將樣品*洗脫下來后，繼續(xù)用三倍柱床體積的洗脫液沖洗凝膠后,，將柱下口放在小燒杯中,，慢慢打開，再將上口慢慢松開,，使凝膠全部回收至小燒杯中,，備用。

葡聚糖凝膠G-25的操作步驟

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