ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作因素

1 加樣

加樣器是一種比較精密的工具,，其在長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)會(huì)因機(jī)械磨損或推動(dòng)桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準(zhǔn),，因此必須定期對(duì)加液器進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)。每次加不同的標(biāo)本均需更換吸嘴,，以免發(fā)生交叉污染,；加樣速度不可太快，以免將標(biāo)本加在孔壁上部,，并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡,，加樣時(shí)還應(yīng)注意操作時(shí)差對(duì)結(jié)果的影響，尤其對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)結(jié)果影響更大,。因此建議在加酶結(jié)合物和底物時(shí)用多道加液器,，或者雙人同時(shí)加樣以減少操作時(shí)差對(duì)結(jié)果的影響，另外有些項(xiàng)目在檢測(cè)前需要稀釋以減少非特異性反應(yīng),。稀釋的方式非常重要,，*方式是采用振蕩器混勻，不可隨意改變混勻方式,。

2 溫育

2.1溫育的溫度：育常采用的溫度有43 ,、37℃、室溫或4℃等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的溫育溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的zui適反應(yīng)溫度?？乖贵w反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2 h 產(chǎn)物的生成可達(dá),，為加速反應(yīng)，可在一定范圍內(nèi)提高反應(yīng)的溫度并在反應(yīng)過(guò)程中連續(xù)振蕩來(lái)增加抗原抗體接觸的概率,?？乖贵w反應(yīng)在4℃更為*，形成的產(chǎn)物更多,、更穩(wěn)定,，但因所需時(shí)間太長(zhǎng)，在ELISA檢測(cè)中一般不予采用,。

2.2溫育的方式：溫育方式常采用溫箱法,、微波輻射法和水浴法。其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結(jié)果的吸光度差異（即“邊緣效應(yīng)”）,?？蓪LISA板置于水浴箱中，板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡,，為避免蒸發(fā)，可用塑料貼封紙覆蓋板孔,。若用溫箱,，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料（如金屬等）,，在盒底墊濕的紗布,，zui后將ELISA板放在濕紗布上。溫育過(guò)程中每塊反應(yīng)板不能重疊放置,，防止溫度擴(kuò)散的不均勻性,。