要使elisa試劑盒供應(yīng)商測(cè)定得到的成果,，不論是定性的仍是定量的，必須嚴(yán)厲依照規(guī)則的辦法制備試劑和施行測(cè)定,。首要試劑的制備關(guān)鍵已如前述,，其他一般性試劑，如包被緩沖液,、洗刷液,、標(biāo)本稀釋液、結(jié)合物稀釋液,、底物工作液和酶反響停止液等,，時(shí)不行掉以輕心。緩沖液可于冰箱中短期保存,，運(yùn)用前應(yīng)調(diào)查是否蛻變,。蒸餾水的質(zhì)量在ELISA中也至關(guān)重要，運(yùn)用新鮮重蒸餾的,。不合格的蒸餾水可使空白值升高,。
測(cè)定的施行中，應(yīng)力求各個(gè)過(guò)程操作的標(biāo)準(zhǔn)化,，下面以板式ELISA為例,，介紹有關(guān)留意事項(xiàng)。
（一）ELISA試驗(yàn)加樣
在ELISA中除了包被外,，一般需進(jìn)行45加樣,。在定性測(cè)定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的性，例如規(guī)則為加樣一滴,。此刻應(yīng)該運(yùn)用相同口徑的滴管,，堅(jiān)持的加樣姿態(tài)，使每滴液體的體積根本相同,。在定量測(cè)定中則加樣量應(yīng)力求,。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)則。加樣時(shí)應(yīng)將液體加在孔底,，防止加在孔壁上部,，并留意不行出現(xiàn)氣泡。
（二）ELISA試驗(yàn)保溫
在ELISA中一般有二次抗原抗體反響,，即加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,，此刻反響的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則的要求，保溫容器是水浴箱,，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不該疊在一起。為防止蒸騰,，板上應(yīng)加蓋,，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該是金屬的,，傳熱簡(jiǎn)單,。如用保溫箱，空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其間,，以平衡溫度,，這在室溫較低時(shí)更為重要。參加底物后,，反響的時(shí)刻和溫度一般不做嚴(yán)厲要求,。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在試驗(yàn)臺(tái)上,，以便不時(shí)調(diào)查,，待對(duì)看管顯色適其時(shí)，即可停止酶反響,。