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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>勿怕原代細(xì)胞消化過(guò)度
對(duì)于初學(xué)者而言,,養(yǎng)原代細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看,。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,,就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處,,特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,,密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的,。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)?,形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,,培養(yǎng)瓶這么一晃,,把因子都給晃散了。經(jīng)??梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,,細(xì)胞老是長(zhǎng)不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,細(xì)胞瘋長(zhǎng),。
在傳代的時(shí)候,,初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度,早早地終止消化,。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈,,吹得滿(mǎn)瓶子都是氣泡。在我看來(lái),,用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,37度消化過(guò)夜,,細(xì)胞也沒(méi)事,。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái),。還有,,動(dòng)作要輕柔,盡量不要產(chǎn)生氣泡,。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大,,對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。
大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,,覺(jué)得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎,?燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,,熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi),。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,,壓力驟降,,培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,釋放出來(lái),。培養(yǎng)基中的碳酸少了,,當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話(huà),,你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢,。(當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高)
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,,你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼,。如果有細(xì)菌的話(huà),這么晃兩下也燒不死多少,。原代細(xì)胞要想燒死全部細(xì)菌,,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口,。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*,,超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。
西洛他唑 含量測(cè)定 100mg 100363-200301
氯唑沙宗 含量測(cè)定 50mg 100364-200301
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原代細(xì)胞
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