原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要注意以下幾點(diǎn)：

1,、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、細(xì)胞密度大約占培養(yǎng)板的80%左右,，轉(zhuǎn)染,。

3、轉(zhuǎn)染期間不要加抗生素,，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。

步驟如下：以24孔培養(yǎng)板為例

1、轉(zhuǎn)染前一天細(xì)胞換新的培養(yǎng)基

2,、制備DNA-Lipofectamine 2000復(fù)合物,，如下:

a,、用50ul無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA（0.8g），輕輕混勻,；

b,、Lipofectamine 2000使用前，輕輕混勻,，用48ul無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋2ul Lipofectamine 2000,，輕輕混勻，室溫孵育5分鐘,；

c,、將a+b的液體加在一起，輕輕混勻,，室溫孵育20分鐘,，使DNA-Lipofectamine 2000復(fù)合物形成；

3,、將100ul DNA-Lipofectamine 2000復(fù)合物加入培養(yǎng)板中,，輕輕前后搖勻；

4,、放入37度孵箱中培養(yǎng)24~48h后,，1：10傳代，加入G418篩選,。加入G418的量設(shè)幾個(gè)梯度或者轉(zhuǎn)染前做MTT,，找好G418對(duì)你所轉(zhuǎn)細(xì)胞致死量的濃度。

5,、等細(xì)胞在G418作用下,，長(zhǎng)滿后凍存幾支（保種）。再克隆化培養(yǎng)：將細(xì)胞消化后計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞,，加入22ml*培養(yǎng)基中,，混勻，分裝在96孔板中（200ul/孔）,。第二天在顯微鏡下,，尋找孔中有單個(gè)細(xì)胞的孔并做標(biāo)記，等做標(biāo)記的孔長(zhǎng)滿后,，消化,、轉(zhuǎn)移到4孔或6孔培養(yǎng)板中，zui后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，凍存,，鑒定。

6,、原代細(xì)胞鑒定成功后,，建議馬上做后續(xù)實(shí)驗(yàn),，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)過(guò)程或凍存中，轉(zhuǎn)進(jìn)去的基因容易從細(xì)胞中掉下來(lái),。
HPLC法含量測(cè)定    100mg    100784-200701    美他多辛
HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查    50mg    100785-200701    D-焦谷氨酸
檢查用    50mg    100786-200501    托拉塞米雜質(zhì)
含量測(cè)定用    50mg    100787-200501    奈達(dá)鉑
檢查用    100mg    100788-200501    3-吲哚甲酸
檢查用    100mg    100788-200501    鹽酸托烷司瓊雜質(zhì)
HPLC法含量測(cè)定    100mg    100789-200501    塞曲司特
HPLC法含量測(cè)定    100mg    100790-200501    氫溴酸西酞普蘭
HPLC法含量測(cè)定    100mg    100791-200501    利拉萘酯
原代細(xì)胞