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凡混入原代細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染,細(xì)胞污染不能*被消除,,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性,。細(xì)胞污染根據(jù)污染源主要可以分為物理性,,化學(xué)性和生物性污染。
物理性污染的來源,、危害及預(yù)防:物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染,。物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分,從而影響細(xì)胞的代謝,。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,,如溫 度、放射線,、振動,、輻射(紫外線或熒光)會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。細(xì)胞,、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線,、輻射或過冷過熱的溫度中,可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變,,如細(xì)胞同步化,、細(xì)胞生長受抑制甚至細(xì)胞死亡。通過實驗室 的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程,,可以減少環(huán)境中物理因素對細(xì)胞的影響,。孵箱應(yīng)放在溫度較恒定的環(huán)境中,周圍不能放置能引起機(jī)械振動的設(shè)備,,如離心機(jī),。培養(yǎng)液及培養(yǎng)試劑應(yīng)放在固定的位置,為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中,,試劑周圍不能放同位素,。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應(yīng)在室溫中放置一段時間后再進(jìn)行實驗,以避免過冷的溫度對細(xì)胞的影響,。
化學(xué)性污染的來源,、危害及預(yù)防 :培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞的污染 ?;瘜W(xué)物質(zhì)并不總是抑制細(xì)胞的生長,,某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進(jìn)細(xì)胞的生長。不同細(xì)胞對化學(xué)物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的,。未純化的物質(zhì),、試劑、水,、血清,、生 長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分,,如氨基酸,,若濃度超過了合適的范圍,也會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性,。同樣,,不同細(xì)胞系 其*培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的,在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制,。玻璃制品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂(通常殘留在瓶蓋的內(nèi)表面)是zui常見的化學(xué)性污染,。水是*一種在凝固時 膨脹的化合物。因此在選擇凍存細(xì)胞的容器時應(yīng)考慮到這個因素,。容器因水的膨脹而發(fā)生破裂是引起試劑污染的重要原因,。為了避免金屬離子、有機(jī)分子,、細(xì)胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對水的污染,,在配制液體,清洗容器時必須使用不含雜質(zhì)的超純水 ,。需要注意的是,,超純水放置過久其純度會下降。在高壓蒸氣滅菌及蒸餾水時水經(jīng)常被污染,,因為高壓蒸氣鍋及純水機(jī)的常規(guī)維護(hù)后可能有少量的化學(xué)物質(zhì)殘留,。為 了保證水的純度,我們應(yīng)采取措施盡量避免化學(xué)物質(zhì)的殘留,。動物血清是原代細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,,但血清又是潛在的生物及化學(xué)污染的來源。由于血清采集于多個動物,,而且不同的工藝及質(zhì)量各不相同,,因此血 清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對不同細(xì)胞的促生長能力及毒副作用取決于這些細(xì)胞的分化功能,、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素,。在進(jìn)行一系列實驗 時,為了保證實驗的可重復(fù)性,,選用同一批次的血清,。培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分,、試劑 培養(yǎng)液,、培養(yǎng)附加成分、試劑都可能成為化學(xué)性污染的來源,。細(xì)胞培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,,并經(jīng)過機(jī)構(gòu)的鑒定,實驗者本人也應(yīng)對上述成分進(jìn)行 純度鑒定,。同時,,正確配置和儲存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的,,應(yīng)該采取標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟,避免液體體積計算錯誤,,混用類似化合物等錯誤,。
含量測定 丙酸睪酮 對照品 100008-199404 50mg
含量測定 醋酸氟輕松 對照品 100010-200507 50mg
鑒別 醋酸氯地孕酮 對照品 100011-198501 50mg
含量測定 醋酸潑尼松 對照品 100012-200105 100mg
UV法含量測定用 地高辛 對照品 100015-200308 30mg
含量測定 地塞米松磷酸鈉 對照品 100016-20011A 100mg
含量測定 氨苯甲酸 對照品 100017-200308 50mg
檢查 對乙酰氨基酚 對照品 100018-200408 1000mg
原代細(xì)胞
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