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當(dāng)前位置：上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>原代細(xì)胞如何消除組織培養(yǎng)的污染
原代細(xì)胞當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),，研究者可能試圖消除或控制污染,。首先，確定污染物是細(xì)菌,、真菌,、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,，因而,，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要,。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟,。
①在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,，稀釋到常規(guī)原代細(xì)胞傳代的濃度,。
②分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中,。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如,，兩性霉素B推薦下列濃度,，0.25，0.50,，1.0，2.0,，4.0,8.0 mg/ml,。
③每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落,，出現(xiàn)空泡,，匯合度下降和變圓。
④確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代,。
⑤在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
⑥重復(fù)步驟4。
⑦在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,，原代細(xì)胞確定污染是否以已被消除,。
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