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(一)原代細胞操作步驟
1.用頸椎脫位的方法處死小白鼠后,迅速剖開腹部取出肝臟,,剪成小塊(去除結(jié)締組織)盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中,,反復(fù)洗滌,,盡量除去血污,,用濾紙吸去表面的液體,。
2.將濕重約1g的肝組織放在小平皿中,用量筒量取8ml預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液,,先加少量該溶液于平皿中,,盡量剪碎肝組織后,再全部加入,。
3.剪碎的肝組織倒入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,,左手持之,,右手將勻漿搗桿垂直插入管中,上下轉(zhuǎn)動研磨3~5次,,用3層紗布過濾勻漿液于離心管中,,然后制備一張涂片①,做好標記,,自然干燥,。
4.原代細胞將裝有濾液的離心管配平后,放入普通離心機,,以2500rpm,,離心15分鐘;(1)緩緩取上清液,,移入高速離心管中,,保存于有冰塊的燒杯中,,待分離線粒體用;(2)同時涂一張上清液片②做好標記,,自然干燥,;(3)余下的沉淀物進行下一步驟。
5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液懸浮沉淀物,,以2500rpm離心15分鐘棄上清,,將殘留液體用吸管吹打成懸液,滴一滴于干凈的載玻片上,,涂片③,,自然干燥。
6.將①,、②,、③涂片用l%甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。
(二)原代細胞結(jié)果 分別于高倍鏡下觀察三張涂片,,描述鏡下所見,。
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