商品屬性：

規(guī)格 50ul 100ul 200ul

產(chǎn)品分類 抗體 / 一抗

英文名稱 ：HMCN2

英文別名  Hemicentin 2

英文別名  Human, Mouse, Dog, Cow, Horse, Sheep

標(biāo)記  Unconjugated

抗體來源  Rabbit

抗體類型  Polyclonal

免疫原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human HMCN2

蛋白細(xì)胞定位  分泌型蛋白

純化方法  affinity purified by Protein A

亞型  IgG

性狀  Liquid

濃度  1mg/ml

儲(chǔ)存液  0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存條件  Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

背景資料 ：

抗體制備過程：

1.材料與試劑

a．提取的動(dòng)物 Ig

b．弗氏佐劑和弗氏不佐劑

d．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔

e．其它材料及試劑

2,、選擇實(shí)驗(yàn)活體,。

3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn),。

4,、試取血樣進(jìn)行測(cè)試，查看免疫效果,。

5,、如果免疫成功，殺死實(shí)驗(yàn)活體，采集全部血清,。

6,、純化出抗體。

7,、鑒定抗體,。胎牛血清（無菌采制）

免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：

一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水,、熒光標(biāo)記的抗體溶液,、緩沖甘油、搪瓷桶三只,、有蓋搪瓷盒一只,、熒光顯微鏡、玻片架,、濾紙,、37℃溫箱等。

二,、實(shí)驗(yàn)步驟

1.滴加0.01mol/L,，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去,，使標(biāo)本保持一定濕度,。

2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其覆蓋標(biāo)本,，置于有蓋搪瓷盒內(nèi),，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片,，置玻片架上,，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后,，再按順序過0.01mol/L,，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘,，并不停地?fù)u晃振蕩,。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分,，但不使標(biāo)本干燥,，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋,。

5.立即用熒光顯微鏡觀察,。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。

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抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為殘基,殘基也可能進(jìn)行化,。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸,；70%乙醇,；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液,；

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行,；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）,；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,；

6.碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。

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