詳細介紹
免疫熒光技術的實驗步驟:
一,、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水,、熒光標記的抗體溶液,、緩沖甘油,、搪瓷桶三只,、有蓋搪瓷盒一只,、熒光顯微鏡、玻片架,、濾紙,、37℃溫箱等。
二,、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,,使標本保持一定濕度,。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其覆蓋標本,,置于有蓋搪瓷盒內,,保溫一定時間以三十分鐘為參考,。
3.取出玻片,置玻片架上,,先用0.01mol/L,,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,,pH7.4的PBS三缸浸泡,,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩,。
4.取出玻片,,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,,加一滴緩沖甘油,,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察,。觀察標本的特異性熒光強度,。
商品屬性:
產品名稱 | 規(guī)格 | 產品分類 | 抗體來源 |
前列腺相關蛋白MSMP抗體 | 50ul、100ul,、200ul | 抗體 / 一抗 | Rabbit |
規(guī)格 50ul 100ul 200ul
產品分類 抗體 / 一抗
英文名稱 :MSMP
英文別名 Microseminoprotein, prostate associated; Msmp; MSMP_HUMAN; PC3 secreted microprotein homolog; PC3-secreted microprotein; Prostate-associated microseminoprotein; PSMP.
英文別名 Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Sheep
標記 Unconjugated
抗體來源 Rabbit
抗體類型 Polyclonal
免疫原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human MSMP
蛋白細胞定位 分泌型蛋白
純化方法 affinity purified by Protein A
亞型 IgG
性狀 Liquid
濃度 1mg/ml
儲存液 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件 Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
背景資料 :
This gene encodes a member of the beta-microseminoprotein family. Members of this protein family contain ten conserved cysteine residues that form intra-molecular disulfide bonds. The encoded protein may play a role in prostate cancer tumorigenesis. [provided by RefSeq, Jan 2011] |
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏佐劑和弗氏不佐劑
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2,、選擇實驗活體。
3,、進行動物免疫實驗,。
4、試取血樣進行測試,,查看免疫效果,。
5、如果免疫成功,,殺死實驗活體,采集全部血清,。
6,、純化出抗體。
7,、鑒定抗體,。胎牛血清(無菌采制)
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抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為殘基,殘基也可能進行化,。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液,;100g/L三醋酸;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5),;胺T反應終止緩沖液;
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行,;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,,可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年,;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,;
6.碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見,。
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