抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏佐劑和弗氏不佐劑
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體,。
3,、進行動物免疫實驗,。
4,、試取血樣進行測試,,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,,殺死實驗活體,,采集全部血清。
6,、純化出抗體,。
7、鑒定抗體,。胎牛血清(無菌采制)
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品分類 | 抗體來源 |
RCAD蛋白抗體 | 50ul,、100ul、200ul | 抗體 / 一抗 | Rabbit |
規(guī)格 50ul 100ul 200ul
產(chǎn)品分類 抗體 / 一抗
英文名稱 :RCAD
英文別名 K0776; E3 UFM1-protein ligase 1; KIAA0776; LZAP-binding protein; Maxer; NLBP; RCAD; UFL1; UFL1_HUMAN.
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
標(biāo)記 Unconjugated
抗體來源 Rabbit
抗體類型 Polyclonal
免疫原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human RCAD
蛋白細胞定位 細胞漿
純化方法 affinity purified by Protein A
亞型 IgG
性狀 Liquid
濃度 1mg/ml
儲存液 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件 Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
背景資料 :
E3 UFM1-protein ligase that mediates ufmylation of target proteins such as DDRGK1/C20orf116. The function of ufmylation is unknown. May act as a tumor suppressor by inhibiting cell invasion, blocking NF-kappa-B signaling and increasing stability of CDK5RAP3. |
免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一,、準(zhǔn)備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液,、緩沖甘油,、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只,、熒光顯微鏡,、玻片架、濾紙,、37℃溫箱等,。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,,pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上,,十分鐘后棄去,使標(biāo)本保持一定濕度,。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液,,使其覆蓋標(biāo)本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),,保溫一定時間以三十分鐘為參考,。
3.取出玻片,置玻片架上,,先用0.01mol/L,,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,,pH7.4的PBS三缸浸泡,,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩,。
4.取出玻片,,用濾紙吸去多余水分,但不使標(biāo)本干燥,加一滴緩沖甘油,,以蓋玻片覆蓋,。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強度,。
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抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng),。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為殘基,殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng),。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液,;100g/L三醋酸;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5),;胺T反應(yīng)終止緩沖液;
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行,;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),,可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年,;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,;
6.碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見,。
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