產(chǎn)品簡介
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號(hào) | GOY-01D3053 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Eukaryotic Phospholipase A2 Group VII (LpPLA2) |
物種 | Rattus norvegicus (Rat,,大鼠) |
上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
—— 銷售熱線 ——
15026555973 |
參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間:2023-03-22 10:20:00瀏覽次數(shù):160
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號(hào) | GOY-01D3053 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Eukaryotic Phospholipase A2 Group VII (LpPLA2) |
物種 | Rattus norvegicus (Rat,,大鼠) |
蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,,通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。
5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告,??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達(dá)90%以上,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號(hào) |
脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)真核蛋白大鼠 | Rattus norvegicus (Rat,,大鼠) | GOY-01D3053 |
英文名稱:Eukaryotic Phospholipase A2 Group VII (LpPLA2)
PLA2G7; PAF-AH; PAFAH; Lp-PLA2; LDL-PLA2; Platelet Activating Factor Acetylhydrolase,Plasma; Phospholipase A2,Group VII; LDL-associated phospholipase A2; Phospholipase A2, Lipoprotein Associated
型號(hào):GOY-01D3053
酶與激酶
代謝通路
感染免疫
物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
來源:真核表達(dá)
宿主293F cell
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細(xì)胞定位::分泌
預(yù)測分子量:48.6kDa
實(shí)際分子量:60kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Leu22~Asn440 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點(diǎn):7.6
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
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操作步驟:
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,,注意低溫操作,;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,,4℃離心5 min,;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL~1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺(tái)上,溫和振蕩15 min,;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法,、BCA法),;
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
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