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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D2760 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Tyrosyl DNA Phosphodiesterase 1 (TDP1) |
物種 | Homo sapiens (Human,,人) |
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產品屬性:
產品名稱 | 物種 | 貨號 |
酪氨酰DNA磷酸二酯酶1(TDP1)重組蛋白人 | Homo sapiens (Human,人) | GOY-01D2760 |
英文名稱:Recombinant Tyrosyl DNA Phosphodiesterase 1 (TDP1)
SCAN1; Tyr-DNA phosphodiesterase 1
型號:GOY-01D2760
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人)
來源:原核表達
宿主E.coli
內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::n/a
預測分子量:20.4kDa
實際分子量:25kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Met1~Gly151 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點:5.1
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,,通過瞬時表達產生目標蛋白,。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量,。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
交付內容:純化好的目標蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,,純度最高可達90%以上。
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,,離心10000轉/分,,4℃離心5 min;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉/分離心5 min洗兩次,;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻,。冰上保存數分鐘待用,。
4. 細胞洗滌后,,轉至新的預冷的離心管中,,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細胞數量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
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