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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-17 10:35:19瀏覽次數(shù):299次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D2066 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Phosphodiesterase 5A, cGMP Specific (P |
物種 | Homo sapiens (Human,人) |
以下是相關(guān)產(chǎn)品:
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產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
磷酸二酯酶5A(PDE5A)重組蛋白人 | Homo sapiens (Human,,人) | GOY-01D2066 |
英文名稱:Recombinant Phosphodiesterase 5A, cGMP Specific (PDE5A)
CGB-PDE; cGMP-binding cGMP-specific phosphodiesterase; cGMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase
型號:GOY-01D2066
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人)
來源:原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細(xì)胞定位::細(xì)胞質(zhì)
預(yù)測分子量:41.3kDa
實際分子量:42kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Glu536~Gln860 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 80%
等電點:6.9
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,,通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。
5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告,??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達(dá)90%以上,。
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min,;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法,、BCA法),;
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4. 細(xì)胞洗滌后,,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Aminoglutethimide
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2 ug pMAL-p5E pMAL-p5E 低溫運輸,,-20℃保存
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2 ug pmCherry-GFP-LC3 pmCherry-GFP-LC3 低溫運輸,,-20℃保存
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0.1mL 綠如藍(lán)染料,PCR級 DNAGREEN, PCR Grade -20℃保存
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2000 U 限制性內(nèi)切BamHI Restriction Endonuclease -20℃保存
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