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D-氨基酸氧化酶(DAO)重組蛋白人

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2023-03-15 13:42:07瀏覽次數:177次

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供貨周期 現貨 規(guī)格 10μg50μg200μg1mg5mg
貨號 GOY-01D1717 應用領域 化工
主要用途 僅供科研實驗 英文名稱 Recombinant D-Amino Acid Oxidase (DAO)
物種 Homo sapiens (Human,,人)
D-氨基酸氧化酶(DAO)重組蛋白人公司正在出售的產品:磷酸化cyclin D1抗體 英文名稱:Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 0.1mlCD13氨肽酶N抗體 英文名稱:CD13 0.1ml間隙連接蛋白32抗體 英文名稱:Connexin-32 0.1ml

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產品屬性:

產品名稱

物種

貨號

D-氨基酸氧化酶(DAO)重組蛋白人

Homo sapiens (Human,人)

GOY-01D1717

 

 

英文名稱:Recombinant D-Amino Acid Oxidase (DAO)

DAMOX

型號:GOY-01D1717

酶與激酶

物種:Homo sapiens (Human,,人)

來源:原核表達

宿主E.coli

內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位::n/a

預測分子量:39.5kDa

實際分子量:-(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽:Met1~Leu347 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)

性狀:凍干粉

純度:> 97%

等電點:-

應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg


蛋白表達及純化:

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,,通過瞬時表達產生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。

3.通過親和,,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量,。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。

交付內容:純化好的目標蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,,純度最高可達90%以上。

操作步驟:

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數分鐘待用,。

2.  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作,;

3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,,4℃離心5 min,;

4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法,、BCA法);

5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液,;

2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次,;

3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數分鐘待用,。

4. 細胞洗滌后,轉至新的預冷的離心管中,,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:

 

細胞數量

Lysis Buffer加入量

107個

0.5 mL~1 mL

5×106個

0.2 mL~0.5 mL

 

 

5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min,;

6. 14,000rpm,,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法,、BCA法),;

7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

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胰輔脂酶抗體 CLPS 0.2ml

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O-Phthalaldehyde鄰二甲醛 OPA10g瓶

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MRS肉湯250g瓶

Oxytetracycline HCl 土2058-46-0100mg

糞便基因組50T盒

Stevioside 甜菊醇471-80-720mg

Solar Fluor 555(效果同Alexa Fluor 555)5 mg支

Imperatorin 歐前胡素482-44-020mg

溶液(50mg/ml)1ml瓶

Camphor 樟腦76-22-2100mg

磁力攪拌子50mm只

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