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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-10 10:16:55瀏覽次數(shù):218次
聯(lián)系我時,,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D921 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Monoacylglycerol-O-acyltransferase 2 ( |
物種 | Homo sapiens (Human,,人) |
以下是相關(guān)產(chǎn)品:
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產(chǎn)品名稱:激活亞基3(PSME3)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,,人) 英文名稱:Recombinant Proteasome Activator Subunit 3 (PSME3)
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產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
單酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移酶2(MOGAT2)重組蛋白人 | Homo sapiens (Human,人) | GOY-01D921 |
英文名稱:Recombinant Monoacylglycerol-O-acyltransferase 2 (MOGAT2)
MGAT2; DGAT2L5; DC5; 2-Acylglycerol O-Acyltransferase 2; Diacylglycerol O-acyltransferase candidate 5; Diacylglycerol acyltransferase 2-like protein 5
型號:GOY-01D921
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人)
來源:原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔
預(yù)測分子量:22.8kDa
實際分子量:22kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Leu48~Gly217 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點:10.0
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白及純化報告,。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,,純度最高可達90%以上,。
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作,;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,,4℃離心5 min,;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4. 細胞洗滌后,,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
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