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蛋白激酶Cα(PKCa)重組蛋白大鼠

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2023-03-08 11:53:21瀏覽次數(shù):295次

聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 10μg50μg200μg1mg5mg
貨號 GOY-01D547 應用領域 化工
主要用途 僅供科研實驗 英文名稱 Recombinant Protein Kinase C Alpha (PKCa)
物種 Rattus norvegicus (Rat,,大鼠)
蛋白激酶Cα(PKCa)重組蛋白大鼠公司正在出售的產品:人過氧化物酶體增殖物激活受體β(PPAR-β/δ)ElISA試劑盒96T 31.2-2000 pg/mL人YY肽3(PYY3) ELISA試劑盒96T 6.25-400pg/mL人cAMP依賴蛋白激酶催化亞基β (PKA C-beta)ELISA試劑盒96T 78-5000 pg/mL

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產品屬性:

產品名稱

物種

貨號

蛋白激酶Cα(PKCa)重組蛋白大鼠

Rattus norvegicus (Rat,大鼠)

GOY-01D547

 

 

英文名稱:Recombinant Protein Kinase C Alpha (PKCa)

PRKCA; PKC-A; AAG6; PKC-Alpha

型號:GOY-01D547

信號轉導

酶與激酶

神經科學

物種:Rattus norvegicus (Rat,,大鼠)

來源:原核表達

宿主E.coli

內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位::分泌

預測分子量:36.2kDa

實際分子量:36kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽:Phe339~Phe597 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.

性狀:凍干粉

純度:> 95%

等電點:5.4

應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg


蛋白表達及純化:

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清),。

3.通過親和,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。

交付內容:純化好的目標蛋白及純化報告,??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上,。

操作步驟:

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2.  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作,;

3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,,離心10000轉/分,4℃離心5 min,;

4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法,、BCA法),;

5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,;

2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉/分離心5 min洗兩次;

3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4. 細胞洗滌后,,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:

 

細胞數(shù)量

Lysis Buffer加入量

107個

0.5 mL~1 mL

5×106個

0.2 mL~0.5 mL

 

 

5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;

6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法,、BCA法);

7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

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MDA-MB-231(人腺細胞)5×106cells/瓶×2

人結腸粘膜上皮細胞培養(yǎng)基100mL

CA46(人Burkitts淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2

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