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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>蛋白>>重組蛋白/RP>> 顆粒酶K(GZMK)重組蛋白人
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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-06 10:44:39瀏覽次數(shù):185次
聯(lián)系我時,,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D426 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Recombinant Granzyme K (GZMK) |
物種 | Homo sapiens (Human,人) |
蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,,通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。
5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告,??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達(dá)90%以上,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
顆粒酶K(GZMK)重組蛋白人 | Homo sapiens (Human,,人) | GOY-01D426 |
英文名稱:Recombinant Granzyme K (GZMK)
GZM-K; TRYP2; PRSS; Serine Protease,Granzyme 3; Tryptase II; Fragmentin-3; Granzyme-3; NK-tryptase-2
型號:GOY-01D426
酶與激酶
腫瘤免疫
感染免疫
免疫分子
物種:Homo sapiens (Human,人)
來源:原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細(xì)胞定位::分泌, 細(xì)胞質(zhì)
預(yù)測分子量:27.1kDa
實(shí)際分子量:30kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Ile27~Asn264 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點(diǎn):9.5
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
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英文名稱:Recombinant Isovaleryl Coenzyme A Dehydrogenase (IVD) 產(chǎn)品名稱:異戊酰脫氫酶(IVD)重組蛋白物種:Mus musculus (Mouse,,小鼠)
英文名稱:Recombinant Methylcrotonoyl Coenzyme A Carboxylase 1 (MCCC1) 產(chǎn)品名稱:甲基丁烯酰羧化酶1(MCCC1)重組蛋白物種:Mus musculus (Mouse,,小鼠)
英文名稱:Recombinant Methylcrotonoyl Coenzyme A Carboxylase 2 (MCCC2) 產(chǎn)品名稱:甲基丁烯酰羧化酶2(MCCC2)重組蛋白物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Recombinant Methylcrotonoyl Coenzyme A Carboxylase 2 (MCCC2) 產(chǎn)品名稱:甲基丁烯酰羧化酶2(MCCC2)重組蛋白物種:Mus musculus (Mouse,,小鼠)
操作步驟:
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,,離心10000轉(zhuǎn)/分,,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細(xì)胞洗滌后,,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min,;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。
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